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Bradford法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下，考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光值也由465nm转移到595nm，通过颜色的强弱即可测定蛋白质浓度的高低。SDS-PAGE电泳凝胶是蛋白电泳的常用凝胶系统，为适配该系统，本品在经典Bradford法基础上做了改进，使得改良Bradford法与SDS-PAGE上样液兼容。

• 快速，10～20个样品只需要10分钟即可完成测定。
  
• 稳定，加样混匀后2分钟既可测定，1小时内吸光度变化不超过10%。
  
• 线性范围在50～1000μg/mL。
  
• 最小测量体积为1～20μL，最低测量蛋白量为0.5μg。
  
• 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
  
• 有常规和微量两种检测模式。
  
• 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
  
• 受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。

1. 将试剂盒提供的Bradford法蛋白定量溶液A与自备超纯水按1∶4比例充分混合即为溶液A工作液(例：4mL溶液A+16mL超纯水=20mL溶液A工作液)。每次配制多少取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面手册计算。
   
2. 用本试剂盒提供的滤纸过滤溶液A工作液。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1～2星期。
   
   • 不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。

3. 测试开始之前，应首先制备BSA标准品梯度稀释液。本试剂盒使用BSA作为标准品。用户也可以使用自备的其他蛋白质浓度测定用标准品。每个浓度具体需要多少体积取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面的手册计算。没有用完的BSA标准品梯度稀释液可以放-20℃待下次使用。
   
   • 常规检测：用溶解样品的缓冲液将BSA溶液稀释成8个浓度：0、31.25、62.5、125、250、500、750、1000μg/mL。
     
   • 微量检测：用溶解样品的缓冲液将BSA溶液稀释成6个浓度：0、2.5、5、7.5、10、20μg/mL。

4. 在标记的离心管中分别加入N个待测蛋白样品和8个BSA梯度稀释液，然后再在每个离心管中按1:50的比例加入溶液A工作液。终体积多少取决于比色杯的体积。
   
   • 如果用3mL比色杯检测，则取100μL样品+5mL溶液A工作液；
     
   • 如果用1mL比色杯检测，则取40μL样品+2mL溶液A工作液；
     
   • 如果用平底透明96孔板，则取20μL样品+1mL溶液A工作液。
5. 样品与溶液A工作液混合后，充分震荡30秒混匀。
   
6. 室温放置5分钟。
   
7. 分光光度计检测吸光度。波长设定=595nm。用96孔板测定时，应确保没有气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。
   
8. 将待测样品的测定值逐一跟用BSA梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得到待测样品的蛋白质浓度。

9. 在标记的离心管中分别加入N个待测蛋白样品和6个BSA梯度稀释液，然后再在每个离心管中按4∶1的比例加入溶液A工作液。终体积多少取决于比色杯的体积。
   
   • 如果用3mL比色杯检测，则取4mL样品+1mL溶液A工作液；
     
   • 如果用1mL比色杯检测，则取2mL样品+0.5mL溶液A工作液；
     
   • 如果用平底透明96孔板，则取400μL样品+100μL溶液A工作液。
10. 样品与溶液A工作液混合后，充分震荡30秒混匀。
    
11. 室温放置5分钟。
    
12. 分光光度计检测吸光度。波长设定=595nm。用96孔板测定时，应确保没有气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。
    
13. 将待测样品的测定值逐一跟用BSA梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得到待测样品的蛋白质浓度。